- 更新時(shí)間2016-09-09
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上海分光光度計(jì)絡(luò)合物組成及穩(wěn)定常數(shù)的測(cè)定分光光度分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸 收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。物質(zhì)的吸收光譜本質(zhì)上就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長(zhǎng)的光能量， 相應(yīng)地發(fā)生了分子振動(dòng)能級(jí)躍遷和電子能級(jí)躍遷的結(jié)果。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子 、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，上海分光光度計(jì)吸收光能量的情況也就不會(huì)相同，因此，每種物質(zhì)就有其 *的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長(zhǎng)處的吸光度的高低判別或 測(cè) 定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。
上海分光光度計(jì)物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收波長(zhǎng)，以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。當(dāng)已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數(shù)后可用同樣條件將該供試品配成溶液，測(cè)定其吸收度,即可由上式計(jì)算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見光區(qū)，除某些物質(zhì)對(duì)光有吸收外，很多物質(zhì)本身并沒有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過(guò)處理使其顯色后再測(cè)定,故又稱比色分析。由于顯色時(shí)影響呈色深淺的因素較多，且常使用單色光純度較差的儀器，故測(cè)定時(shí)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌吠瑫r(shí)操作。
上海分光光度計(jì)在食品生產(chǎn)中為了保證有顏色的飲料(如可樂(lè)、果汁及茶飲料)產(chǎn)品的顏色一致，可以在可見光區(qū)用紫外可見上海分光光度計(jì)來(lái)測(cè)定其吸光度值，使色差符合產(chǎn)品要求。上海分光光度計(jì)在發(fā)酵業(yè)中也可通過(guò)測(cè)定吸光度值來(lái)確定產(chǎn)品的發(fā)酵完成程度。對(duì)于一些成分比較單一的產(chǎn)品也可通過(guò)測(cè)定吸光度值來(lái)確定產(chǎn)品合格與否。比如，判定營(yíng)養(yǎng)增強(qiáng)劑維生素Bl的質(zhì)量就可以在400 nm下測(cè)定其吸光度值，當(dāng)其值不超過(guò)0．020時(shí)，即可確定為合格品。
事實(shí)上，上海分光光度計(jì)的設(shè)計(jì)原理和工作原理，允許吸光值在一定范圍內(nèi)變化，即儀器有一定的準(zhǔn)確度和度。如Eppendorf Biophotometer的準(zhǔn)確度≤1.0%（1A）。這樣多次測(cè)試的結(jié)果在均值1.0%左右之間變動(dòng)，都是正常的。另外，還需考慮核酸本身物化性質(zhì)和溶解核酸的緩沖液的pH值，離子濃度等：在測(cè)試時(shí)，離子濃度太高，也會(huì)導(dǎo)致讀數(shù)漂移，因此建議使用pH值一定、離子濃度較低的緩沖液，如TE，可大大穩(wěn)定上海分光光度計(jì)讀數(shù)。樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素：由于樣品中不可避免存在一些細(xì)小的顆粒，尤其是核酸樣品。
